hepsisosyal
Blog Sitemiz : hpvliyiz.wordpress.com
Toplam 1 adet sonuctan sayfa basi 1 ile 1 arasi kadar sonuc gösteriliyor
  1. #1
    Doktor
    Üyelik tarihi
    12.Aralık.2016
    Nereden
    İSTANBUL, YENİKAPI
    Mesajlar
    345
    Tecrübe Puanı
    7

    HPV nin Tanısı 1

    HPV infeksiyonlarının çoğu klinik belirti vermez; latent veya subklinik
    infeksiyonlar daha yaygındır. Bu sebeple en çok virolojik tanı yöntemleri
    kullanılır.
    HPV, hücre kültürü veya laboratuvar hayvanlarında üretilemez .
    Cinse özgül antiserum kullanılarak doku veya yayma örneklerinde HPV
    ile olan produktif viral infeksiyon, immunolojik bir test ile saptanabilir. EM
    yöntemi ile virusun veya infekte dokuda in situ hibridizasyon ( ISH )
    yöntemiyle viral DNA’nın gösterilmesiyle tanı gerçekleştirilebilir. Ancak özgül
    bir HPV tipinin laboratuvar tanısı, nükleik asit çalışmalarının yapılmasını
    gerektirir
    Morfolojik Tanı
    HPV infeksiyonunun muhtemel tanısı mikroskobik olarak histolojik
    muayenede koikilositozun gösterilmesi ile konabilir. Viral infeksiyonun varlığını
    gösteren sitolojik değişikliklerin Papanicolau boyası ile saptanması
    servikovaginal hücrelerde tarama amacı ile bugün kullanılmaktadır. . Dr.
    Papanicolau tarafından ortaya atılan bu yöntem kısaca Pap smear olarak
    bilinmektedir. Ancak duyarlılığı düşük olduğundan kesin tanı için immunolojik
    veya nükleik asit tanı yöntemleri kullanılmaktadır .
    Viral Proteinlerin Saptanması
    Doku kesitleri veya sürüntü örneklerinde bütün tipler arasında çapraz
    reaksiyon veren cinse özgü antiserum kullanılarak herhangi bir immunolojik
    yöntem ile Papillomavirus kapsid antijenleri saptanabilir. Bu testler sadece
    produktif infeksiyonu saptamada kullanılır, viral partikülllerin EM ile
    incelemesinden daha hassas olmasına rağmen yine de yeterince sensitiv
    değildir.
    Antiserum bütün HPV tipleri ile çapraz reaksiyon verdiği için, pozitif
    reaksiyon HPV tipini göstermez. Ayrıca negatif sonuç da HPV infeksiyonunu
    ekarte ettirmez, çünkü kapsid antijeni, histolojik olarak verruka tanısı almış
    örneklerde her zaman aynı şekilde eksprese olmaz fakat HPV cevabı oluşur.
    HPV tip spesifik IgG antikor pozitifliği yıllarca persiste edebilir. Bu yüzden
    serolojik testler akut ve geçirilmiş infeksiyonları ayırt etmek için uygun değildir
    .
    Viral Nükleik Asit Saptanması
    Geçirilmiş veya geçirilmekte olan HPV infeksiyonunun ayırıcı tanısında
    güvenilir bir serolojik test olmaması ve virus izolasyonunun yapılamaması
    nedeni ile kesin tanı HPV DNA’sının örnekte gösterilmesine dayanmaktadır.
    HPV infeksiyonun tanısında kullanılan moleküler tanı testleri üç grupta
    incelenebilir.
    1) Hibridizasyon testleri : ISH , southern blot hibridizasyon ( SBH ), dot blot
    hibridizasyon ( DBH ) ve filter in situ hibridizasyon ( FISH )
    2) Hybrid Capture testi ( HC, Hibrid yakalama testi ) : Sinyal amplifikasyon
    kullanılarak yapılan direkt DNA testi
    3) Polimeraz zincir reaksiyonu ( Polymerase chain reaction; PCR ) : DNA
    amplifikasyon testi

    HPV’nin tanı metotları arasında PCR en duyarlı metoddur ve referans
    test olarak kabul edilir PCR ve HC tanıda en çok kullanılan testlerdir.
    1) Hibridizasyon testleri : HPV tanısı için ilk çalışmalarda kullanılmıştır.
    İSH ile HPV, direkt olarak hücre ve biyopsi örneklerinde tespit edilir. Bu metod
    intraselüler HPV DNA ile hibridize olan spesifik probların kullanımına dayanır.
    Bu test ile virusun hücredeki lokalizasyonu; hücrede integre veya epizomal
    halde bulunup bulunmadığı tespit edilebilir. SBH testi PCR ile kıyaslandığında
    spesifitesi ve sensitivitesi daha düşüktür. Ayrıca bu yöntem fazla miktarda doku
    gerektirmektedir ve fikse ederek saklanmış doku örneklerinde DNA’nın kırılması
    nedeniyle uygun değildir. Alternatif olarak HPV DNA, DBH , FISH ile tespit
    edilebilir. Bu testler genellikle araştırma amacıyla kullanılır, yapılması yorucu ve
    zaman alıcıdır. Fazla sayıda örneğin incelenmesi için uygun değildir, rutin
    olarak kullanılamaz .
    2) Hybrid Capture testi : HC I ( Digene ) ve HC II ( Digene ) olmak
    üzere iki tipi mevcuttur. Hybrid Capture Tube Test olarak da bilinen HC I
    testi tüpte yapılan non-radyoaktif sinyal amplifikasyon metodudur. Bu test ile 5
    LR HPV ve 9 HR HPV tipi tanınmaktadır. Cut off değeri 10 pg HPV DNA /ml’dir.
    HC II ise HC I’in mikroplak formatında geliştirilmiş versiyonu olup HR HPV tip
    sayısı 13’e yükseltilmiştir. Cut off değeri 1 pg HPV DNA/ml’dir. HC II testi, HC
    I’e göre 10 kez daha yüksek sensitiviteye sahiptir, spesifitesi de artmıştır. HC II
    testi servikal hücrelerin HPV testi için FDA’den onay alan tek metoddur. HC II
    testi örnekteki hedef HPV DNA ‘nın spesifik RNA problarıyla solüsyon fazda
    hibridizasyonuna dayanır. HC II test sisteminde servikal kanserde en sık
    bulunan 13 yüksek risk ve beş düşük risk HPV tipinin genomik sırasına
    komplementer RNA probları kullanılır ki bu spesifik RNA probları yüksek risk tip
    prob kokteyl ve ve düşük risk prob kokteyl formatında hazırlanmıştır . İki farklı
    RNA prob kokteyli deneyde ayrı ayrı kullanılır ve böylece test, örnekteki HPV
    DNA‘nın sadece düşük veya yüksek risk grubunda olduğu hakkında bilgi
    verir, ancak spesifik HPV genotipi hakkında bilgi vermez (23,26 ).
    HC II testinde, serviksten alınan hücreler transport besiyerine alınır. Sonra
    DNA denatüre edilerek tek sarmallı hale getirilir ve hasta örneğindeki tek
    sarmallı hedef HPV DNA, yüksek ve düşük risk RNA prob kokteyl ile ayrı ayrı
    inkübe edilerek DNA-RNA hibridizasyonu gerçekleşir. Oluşan bu hibridler DNARNA’ya
    karşı spesifik antikorlarla kaplı mikroplağa transfer edilir. Mikroplak
    kuyularına bağlı antikorlar tarafından yakalanan hibridler daha sonra ilave
    edilen alkalen fosfataz ile konjuge anti-hibrid antikorlarına bağlanır. Fazla
    antikorlar ve hibridize olmamış problar yıkama ile uzaklaştırılır ve kalan
    hibridler, alkalen fosfataz enzimi ile reaksiyona giren kemiluminesan subsrat
    ilavesi ile oluşan ışık sonucu tespit edilir. Yayılan ışık miktarı luminometrede
    ölçülür ve her örnek tarafından oluşturulan ışık miktarı testteki üç kalibratörün
    yaydığı ışık miktarının ortalamasına bölünmesi ile elde edilen oran olan relative
    light unit ( RLU ) olarak ifade edilir ve örnekteki mevcut hedef DNA miktarı ile
    orantılıdır . HC II testi viral yükün semikantitatif ölçümünü sağlar. Pozitif
    sonuçlar için FDA’in tavsiye ettiği cut off değeri 1.0 RLU’dur ve 1pg HPV
    DNA/ml veya 5000 genoma eşdeğerdir ve bu değerden yüksek bulunan
    örnekler pozitif kabul edilir. HSIL tespitinde histolojik tanı referans test olarak
    dikkate alındığında HC II testinin sensitivitesi , % 84 ile %100 arasında,
    spesifitesi, % 85-89 arasında değişmektedir . HC II testi bir çok ülkede
    klinik çalışmalarda yaygın olarak kullanılmaktadır. Klinik değerlendirmede
    sadece yüksek risk prob kokteylinin kullanılması test süresini ve maliyetini
    azaltır. HC II testinin 96 kuyucuklu mikroplak formatında olması otomasyon için
    uygundur. HC II testi PCR gibi hedef amplifikasyonuna dayanmadığından kros
    kontaminasyon riski düşüktür.
    Yeni prototip Hybrid Capture III ( Digene ) testi geliştirilmiştir. HC II testine
    benzer ve HPV DNA ile hibride olan aynı RNA probları kullanılır. Ancak HC
    II’ye göre daha sensitiv bulunmuştur, çünkü DNA-RNA hibridlerini yakalamak
    için HC II testindeki anti DNA-RNA antikorları yerine strepavidin ile kaplı
    kuyucukları olan mikrotitrasyon plağı kullanılır.

    Yard.Doç.Dr Levent TÜRK (Dr. Medusa) Muayehane: Küçük Langa Caddesi, No:30 – 12 YENİKAPI/ İSTANBUL 0505 600 40 10 – 0212 586 81 80 Mail: drleventturk@gmail.com
    Konu drmedusa tarafından (26.Aralık.2016 Saat 19:32 ) değiştirilmiştir.

Bu Konu için Etiketler

Yetkileriniz

  • Konu Acma Yetkiniz Yok
  • Cevap Yazma Yetkiniz Yok
  • Eklenti Yükleme Yetkiniz Yok
  • Mesajınızı Değiştirme Yetkiniz Yok
  •